【摘 要】目的建立檢測注射用丹參酮ⅡA磺酸鈉中內毒素的試驗方法。方法運用干擾初篩法對供試品進行干擾試驗，采用鱟試劑法對樣品中的內毒素進行檢測。 結果注射用丹參酮ⅡA磺酸鈉在藥液稀釋濃度為0.016 8 mg·ml-1以下時，與鱟試劑反應無干擾。結論所采用的細菌內毒素檢查法可用于注射用丹參酮ⅡA磺酸鈉的內毒素檢查。

　　【關鍵詞】注射用丹參酮ⅡA磺酸鈉 細菌內毒素檢查法 干擾試驗

　　細菌內毒素檢查法又稱鱟試劑法，是利用鱟試劑與細菌內毒素發生凝集反應，來檢查藥品中內毒素含量是否符合規定的方法，具有快速、靈敏，重復性好，操作簡便的特點。

　　丹參酮ⅡA磺酸鈉為丹參酮ⅡA經磺化而成的水溶性鈉鹽，它能增加冠脈血流量，提高心肌耐缺氧能力，抑制血小板集聚及抗血栓形成[1]，臨床上主要用于冠心病、心絞痛等癥的治療。本檢查法采用兩個廠家的鱟試劑對3批注射用丹參酮ⅡA磺酸鈉進行了細菌內毒素檢查的干擾試驗。現報道如下。

　　1 材料

　　注射用丹參酮ⅡA磺酸鈉(四川大學華西藥學院藥劑學教研室，批號：040101、040102、040103，規格：10mg);鱟試劑(TAL：標示靈敏度0. 125 EU·ml-1，批號：0305301，標示靈敏度0.06 EU·ml-1，批號0302011，湛江安度斯生物有限公司;標示靈敏度0.06 EU·ml-1，批號20030321，湛江海洋生物制品廠);細菌內毒素工作標準品(10 EU·支-1，批號：030723，中國藥品生物制品檢定所);細菌內毒素檢查用水(BET水：含細菌內毒素<0.003 EU·ml-1，批號：0308050，湛江安度斯生物有限公司)。

　　XW-80旋渦混合器(上海青浦滬西儀器廠);KXB-12A恒溫培養箱(上海科析試驗儀器廠)。其余實驗材料均經250℃烘烤1 h。

　　2 方法與結果

　　2.1 鱟試劑標示靈敏度(λ)的復核以細菌內毒素檢查用水溶解內毒素工作標準品，并配制成含內毒素2.0λ，1.0λ，0.5λ，0.25λ系列濃度的溶液。每一濃度平行做4支，同時用細菌內毒素檢查用水做2支陰性對照，記錄結果，并按式λC = antilg(∑X/4)計算λC值。結果表明：每一批鱟試劑靈敏度測得值均在0.5～2.0λ范圍內，符合要求，可按標示靈敏度值使用。結果見表1。表1 鱟試劑靈敏度復核結果(略)

　　2.2 內毒素限值(L)的確定本品臨床用法用量為40～80 mg·60 kg-1，故

　　L=5.0 EU·Kg-1·h-11.33 mg·kg-1·h-1=3.76 EU·mg-1

　　綜合考慮本品臨床用藥的相關因素，將本品細菌內毒素限值確定為3.75 EU·mg-1。

　　2.3 干擾試驗預試驗根據最小有效稀釋濃度，c=λ/L，可知對應于靈敏度(λ)0.25，0.125，0.06，0.03 EU·ml-1TAL，注射用丹參酮ⅡA磺酸鈉稀釋濃度分別為0.067，0.033 5，0.016 8，0.008 38 mg·ml-1，用BET水將供試品(批號：040101)稀釋成以上4個濃度備用。

　　取16支λ為0.125 EU·ml-1的TAL，其中8支作為供試品陰性對照NPC，即分別用0.1 m1上述稀釋的4個濃度供試品復溶TAL，再各加0.1 mlBET水，每一濃度供試品 2 支反應管;另8支作為供試品陽性對照PPC，即分別用0.1 ml上述稀釋的4個濃度供試品復溶TAL，再各加2λ(0.25 EU·ml-1)的內毒素溶液0.1 ml，每一濃度供試品 2 支反應管。結果見表2。本品稀釋至0.016 8 mg·ml-1以下時，可能對細菌內毒素與鱟試劑的反應無干擾作用。故擬采用λ為0.06 EU·ml-1的TAL，本品0.016 8 mg·ml-1稀釋濃度作正式的干擾試驗。表2 樣品干擾試驗預試驗結果(略)

　　2.4 供試品干擾試驗用BET水和0.0168 mg·ml-1的供試品液分別復溶TAL(λ為0.06 EU·ml-1)，然后將每一供試品液復溶的TAL分別分為4列，每列4支;對應各列分別加入含細菌內毒素2.0λ，1.0λ，0.5λ，0.25λ 4種濃度的溶液。另取BET水和3批供試液各2支作為陰性對照管。于37～38℃恒溫60 min，觀察結果，并按Es=antilg(∑X/4)，Et=antilg(∑X/4)計算Es和 Et。結果Es、Et在0.5～2.0λ之間，且Et /Es的值在0.5～2.0之間，可以認為0.016 8 mg·ml-1的供試品濃度對細菌內毒素與鱟試劑的反應無干擾作用(見表3)。表3 供試品干擾試驗結果(略)

　　2.5 供試品細菌內毒素檢查取3批供試品用細菌內毒素檢查用水稀釋為0.016 8 mg·ml-1，以靈敏度為0.06 EU·ml-1 的鱟試劑依法檢查。結果見表4。結果3批樣品均符合規定。表4 供試品細菌內毒素檢查結果(略)

　　3 討論

　　由干擾預試驗可知，NPC系列反應全部為陰性，PPC系列反應在供試品稀釋濃度>0.033 5 mg·ml-1時為陰性，≤0.016 8 mg·ml-1時為陽性。說明供試品在較高濃度時對鱟試劑與細菌內毒素的反應有抑制作用，而將供試品稀釋至0.016 8 mg·ml-1(最大不干擾濃度)，并選用其對應靈敏度的TAL后則無干擾作用。

　　本實驗結果證實，將本品適當稀釋后對細菌內毒素與鱟試劑的反應無干擾作用，說明采用細菌內毒素檢查法進行本品熱原質的安全性檢查具有可行性，可建立該品種的細菌內毒素檢查法。

　　【參考文獻】

　　[1]華浩明，王燦暉. 不穩定型心絞痛的研究進展及中醫藥防治概況[J].中國中西醫結合急救雜志，2003，10(2)：123.

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