摘 要: 為了進一步完善槐米的質量評價方法，并對不同產地槐米進行質量評價，本研究按照 2015 版《中華人民共和國藥典》方法測定水分、總灰分、酸不溶性灰分、浸出物和總黃酮;采用 HPLC 法測定槐米中蘆丁、水仙苷、槲皮素、異鼠李素 4 種成分的含量，并通過 SPSS 20. 0 軟件進行聚類分析和主成分分析。54 批槐米樣品的水分、總灰分和酸不溶性灰分均符合藥典標準;南方產槐米的浸出物及黃酮類成分含量均普遍高于北方產槐米。聚類分析和主成分分析將 54 批槐米聚為 3 類，分類結果與地域有較大關系。本研究較全面地評價了全國 54 個產地槐米的質量，為槐米的產品開發提供了實驗依據。

　　關鍵詞: 槐米;質量評價;聚類分析;主成分分析

　　槐米為豆科植物國槐 Sophora japonica L. 的干燥花蕾，具有清熱、涼血、止血的功效[1]?，F代藥理研究表明槐米具有保護心腦血管[2，3]、改 善 糖 尿病[4]、抗菌[5]、抗氧化[6]和抑制黑色素生成[7]等作用。槐米中含有大量的黃酮及其苷類成分，如蘆丁、水仙 苷、槲 皮 素、異 鼠 李 素、山 奈 酚、染 料 木 素等[8，9]。槐米的產地在中國分布范圍較廣，由于各地氣候、地形、土壤條件等不同，所產槐米質量也不均一。李振志[10]等研究發現不同產地槐米中蘆丁的含量有顯著性差異，其中以廣西桂林產含量最高。國槐的花期為 6 ～ 8 月，在不同時期，槐花中黃酮類成分的含量也有較大差異[11]。為了綜合開發槐米產品及保障用藥安全，有必要對各產地槐米藥材的質量進行全面的評價。Liu [8]等采用 UPLC-MS /MS法同時測定了槐米中 5 種黃酮類成分，但是檢測成本較高，不易推廣。本實驗建立了同時測定槐米中蘆丁、水仙苷、槲皮素和異鼠李素 4 種成分的 HPLC 方法，對不同產地槐米中 4 種成分含量進行測定，并通過主成分分析法進行評價;參照 2015 版《中華人民共和國藥典》[1]對不同產地槐米藥材進行水分和灰分的檢查以及浸出物和總黃酮的含量測定并采用聚類分析法進行歸類。通過以上研究，更加全面地評價各地槐米的質量，為槐米藥材的臨床使用和產品開發提供依據。

　　1 儀器與試藥

　　儀器:Agilent 1260 高效液相色譜儀(Agilent 公司，美國;DAD 檢測器)，UV 2600 紫外分光光度計 (島津公司，日本)，Milli(Q Integral 5 型純水儀(Millipoer 公司，美國)，BSA 124(S 型電子天平( Sartorius，德國)，KQ(250 DB 型數控超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司，中國)，8(10 型馬弗爐(沈陽節能電爐廠，中國)，XMTB 數顯式電熱恒溫水浴鍋 (上海躍進醫療器械有限公司，中國)，G2X(9240 MBE 電熱鼓風干燥箱(上海博訊實業有限公司醫療設備廠，中國)。

　　對照品:蘆丁對照品(批號:MUST(16070511，純 度: ≥ 99% )、槲 皮 素 對 照 品 ( 批 號: MUST (16072203，純度:≥ 98% )、異鼠李素對照品(批號: MUST(16092001，純度:≥ 98% )購自成都曼斯特生物科技有限公司;水仙苷對照品(批號:TAQT( LR- LA，純度:≥ 93. 1% ) 購自中國食品藥品檢定研究院。

　　試劑:乙腈( TEDIA 公司，美國;色譜純)、甲醇 (TEDIA 公司，美國;色譜純)、醋酸(TEDIA 公司，美國;色譜純)，其它試劑均為分析純。

　　樣品產地:在全國范圍內共收集樣品 54 批，詳細信息見表 1。樣品經重慶市中藥研究院李隆云研究員鑒定為豆科植物國槐 Sophora japonica L. 的干燥花蕾。

　　2 實驗方法

　　2. 1 水分、灰分、浸出物及總黃酮的檢測

　　樣品處理及檢測方法按照《中華人民共和國藥典》[1]中相關方法進行檢測。

　　2. 2 4 種黃酮類成分含量測定

　　2. 2. 1 色譜分析條件

　　色譜柱:Inertsil  ODS-3(250 mm × 4. 6 mm，5 μm)。流動相:乙腈(A)-1% 醋酸水溶液(B)，梯度洗脫，0 ～ 5 min，5% A;5 ～ 10 min，5% → 20% A;10 ～ 20 min，20% A;20 ～ 30 min，20% → 32% A;30 ～ 45 min，32% → 35% A;45 ～ 50 min，35% → 5% A; 50 ～ 55 min，5% A。流速 1. 0 mL /min，檢測波長 257 nm，柱溫 30 ℃，進樣量 10 μL。

　　2. 2. 2 混合對照品溶液的制備

　　精密稱取對照品水仙苷 6. 04 mg、槲皮素 10. 18 mg、異鼠李素 3. 00 mg，置 10 mL 容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻;精密移取上述水仙苷溶液 2 mL、槲皮素溶液 2 mL、異鼠李素溶液 0. 5 mL 與蘆丁 9. 04 mg 置 10 mL 容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得蘆丁濃度為 904. 0 μg /mL、水仙苷濃度為 120. 8 μg /mL、槲皮素濃度為 203. 6 μg / mL、異鼠李素濃度為 15. 0 μg /mL 的混合對照品溶液。再稀釋得到梯度濃度的混合對照品溶液。

　　2. 2. 3 供試品溶液的制備

　　精密稱取干燥槐米樣品粉末(過 60 目篩)0. 1 g，置具塞錐形瓶中，加甲醇 50 mL，稱定質量。于 25 ℃超聲處理(功率 400 W，頻率 40 kHz)30 min，冷卻，用甲醇補足失重，搖勻，0. 45 μm 微孔濾膜濾過，取濾液即得。

　　2. 2. 4 方法學考察

　　2. 2. 4. 1 線性關系考察

　　將梯度濃度的混合對照品溶液按“2. 2. 1”項下色譜條件進樣檢測。以各對照品峰面積(Y)為縱坐標，濃度(X，μg /mL)為橫坐標，做標準曲線，蘆丁的線性方程為 Y =18. 872X + 34. 875，r = 0. 999 9;水仙苷的線性方程為 Y =9. 763X -1. 661，r = 0. 999 8;槲皮素的線性方程為 Y = 17. 583X - 14. 405，r = 0. 999 9;異鼠李素的線性方程為 Y = 16. 203X - 3. 285，r = 0. 999 9。結果表明，蘆丁在 56. 5 ～ 904. 0 μg /mL、水仙苷在 7. 6 ～ 120. 8 μg /mL、槲皮素在 1. 6 ～ 203. 6 μg /mL、異鼠李素在 0. 9 ～ 15. 0 μg /mL 范圍內線性關系良好。

　　2. 2. 4. 2 檢測限與定量限

　　配制一系列質量濃度由高到低的對照品溶液，按“2. 2. 1”項下色譜條件進樣檢測。以信噪比為 3 時考察檢測限、信噪比為 10 時考察定量限，結果表明蘆丁、水仙苷、槲皮素、異鼠李素的檢測限分別為 159、329、223、234 ng /mL，定量限分別為 556、940、 556、938 ng /mL。

　　2. 2. 4. 3 精密度試驗

　　取同一混合對照品溶液按“2. 2. 1”項下色譜條件連續進樣 6 次，記錄各成分的峰面積。結果蘆丁、水 仙 苷、槲 皮 素、異鼠李素峰面積 RSD 分 別 為 1. 26% 、2. 18% 、1. 27% 、2. 14% 、1. 58% ，表明儀器精密度良好。

　　2. 2. 4. 4 重復性試驗

　　取同一來源槐米樣品，按“2. 2. 3”項下方法平行制備 6 份供試品溶液，分別進樣，記錄各成分的峰面積。結果蘆丁、水仙苷、槲皮素、異鼠李素峰面積RSD 分別為 1. 87% 、1. 90% 、1. 44% 、1. 34% ，表明本方法重現性良好。

　　2. 2. 4. 5 穩定性試驗

　　取同一供試品溶液，按“2. 2. 1”項下色譜條件分別在 0、2、4、8、12、24 h 進樣，記錄各成分的峰面積。結果蘆丁、水仙苷、槲皮素、異鼠李素峰面積RSD 分別為 1. 11% 、1. 24% 、1. 99% 、1. 32% ，表明供試品溶液于 24 h 內測定結果穩定。

　　2. 2. 4. 6 回收率試驗

　　精密稱取已知含量的同一來源槐米樣品 6 份，每份 0. 05 g，分別精密添加與樣品中含量相當的蘆丁、水仙苷、槲皮素、異鼠李素對照品，按“2. 2. 3”項下方法制備供試品溶液，按“2. 2. 1”項下色譜條件進樣 檢 測，計算得到蘆丁的平均加樣回收率為 100. 31% ，RSD 為 1. 73% ;水仙苷的平均加樣回收率為 103. 77% ，RSD 為 1. 85% ;槲皮素的平均加樣回收率為 100. 63% ，RSD 為 2. 75% ;異鼠李素的平均加樣回收率為 101. 93% ;RSD 為 2. 55% 。結果表明本方法的回收率良好。

　　3 結果與分析

　　3. 1 水分、灰分、浸出物及總黃酮的檢測

　　槐米樣品中水分、灰分、浸出物及總黃酮的檢測結果見表 2。結果顯示 54 批槐米樣品的水分含量在 4. 83% ～ 10. 81% 之間，均低于 11. 00% ，符合藥典規定;總灰分含量在 3. 42% ～ 8. 93% 之間，均低于 9. 00% ，酸不溶性灰分含量在 0. 73% ～ 2. 93% 之間，均 低 于 3. 00% ，符 合 藥 典 規 定。南 方 產 樣 品 30% 甲醇浸出物含量在 43. 69% ～ 55. 11% 之間，均符合藥典規定;北方產樣品 30% 甲醇浸出物含量在 32. 38% ～ 52. 56% 之間，差異較大，其中 BF-4、BF- 6、BF-9、BF-10 和 BF-24 的含量低于藥典對槐米浸出物 的 要 求。南方產槐米樣品中總黃酮含量在 20. 10% ～ 42. 98% 之間，均符合藥典規定;北方產樣品總黃酮含量在 9. 91% ～ 25. 55% 之間，僅有 7 批 (BF-2、BF-7、BF-8、BF-11、BF-13、BF-18 和 BF-24) 合格，說明南方產槐米樣品普遍優于北方。

　　3. 2 4 種黃酮類成分含量測定

　　按“2. 2. 3”項下方法每個樣品平行制備 3 份供試品溶液，按“2. 2. 1”項下色譜條件進樣檢測，記錄色譜圖。根據線性方程分別計算蘆丁、水仙苷、槲皮素和異鼠李素的百分含量，結果見表 3。

　　由結果可知，南方產槐米樣品中蘆丁含量在 18. 402 2% ～ 37. 801 1% 之間，均符合藥典規定;其中武漢(NF-1)產槐米中蘆丁含量最低，推測這與其處于平原地區，氣候與其他中南、西南高海拔產區差異較大有關。北方產樣品蘆丁含量在 5. 530 0% ～ 21. 879 5% 之間，其中約有一半不合格。

　　南方和北方樣品中水仙苷、槲皮素和異鼠李素含量也有較大差異。水仙苷含量分別為 0. 544 6% ～ 2. 802 8% 和 0. 124 2% ～ 1. 796 5% ;而槲皮素和異鼠李素含量在北方樣品中均出現了未檢出的情況，且明顯南方樣品優于北方樣品。

　　3. 3 化學模式識別

　　3. 3. 1 聚類分析

　　浸出物、總黃酮及單個黃酮類成分含量是評價槐米質量的重要指標。本研究以浸出物、總黃酮含量、蘆丁、水仙苷、槲皮素和異鼠李素含量的標準化數據為變量，運用 SPSS 20. 0 軟件，以平方歐氏距離作為度量標準，對 54 批樣品進行系統聚類分析，結果見圖 2。54 批樣品共被分為 3 大類，其中北方產槐米被聚為一類;南方產槐米可分為 2 類，產于湖南、云南、廣西的被歸為一類，產于重慶、四川的被歸為一類。結果表明，南、北方所產槐米質量有較大差異，說明槐米的質量受地域及氣候的影響較大。

　　3. 3. 2 主成分分析

　　運用 SPSS 20. 0 軟件，以槐米中蘆丁、水仙苷、槲皮素、異鼠李素含量作為變量，以特征值和累計貢獻率作為判定依據，對不同產地槐米進行主成分分析。根據降 維 結 果，共 挑 選 出 2 個 主 成 分 PC1、 PC2，特征值分別為 2. 036、1. 510。各成分方差貢獻值分 別 為 50. 893% 、37. 751% ，累 積 貢 獻 值 達 到 88. 644% ，具有較強的代表性，可用來評價槐米的質量。

　　《不同產地槐米的質量綜合評價研究》來源：《天然產物研究與開發》2018年9期，作者：譚均; 李隆云; 王計瑞; 丁剛; 徐進。